P. 1
LAB_โครมาโตกราฟี Chromatography

LAB_โครมาโตกราฟี Chromatography

|Views: 3,118|Likes:
Published by nawapat

More info:

Published by: nawapat on Jul 14, 2010
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOC or read online from Scribd
See more
See less

12/23/2012

กระบวนวิชาเทคนิ คทางห้องปฏิบัติการชันสูตร 2 (510204

)
ภาคเรี ยนที่ 2 ปี การศึกษา 2550
ผู้สอน: ผศ.uร.ร้ งสิริ Ïชติป_ิเวชกñ คuะเทคนิ คการl¡ทย
uหาวิทยาñั ยเชียง¡หu
E-mail: c_roongsiri@hotmail.com
วัตถุประสงค์การเรี ยนรู้
1. เ¡ ่ อ¡ห้นักศึกษาuีควาuรู้ ควาuเI้า¡1¡นหñักการIองวิüีÏครuาÏตกรา¡ี
lบบตาง_
2. เ¡ ่ อ¡ห้นักศึกษาเI้า¡1ควาuหuายIองศั¡ทเทคนิ ค¡ น_านที ่
¡ช้¡นวิüีÏครuาÏตกรา¡ี lบบตาง_
3. เ¡ ่ อ¡ห้นักศึกษาสาuารuเñอกวิüีการlยกสารÏuยÏครuาÏตกรา¡ี ที ่
เหuาะสulu้
โครมาโตกราฟี (Chromatography)
Chromatography เป นเทคนิ คที ่ นิ ยu¡ช้¡นการlยกสารชี ว
Ïuเñกñ เน ่ อง1ากuีหñักการประยกต¡ช้lu้หñากหñาย lñะสาร
ที ่lยกlu้นั น สาuารuนาuาวิเคราะหหร อวัuปริ uาulu้ทันที lñ้ว
ยังสาuารuเตรี ยuสาร¡นปริ uาuuากlu้
ผññั¡ü Iอง กา ร lยกสา ร Ï uยวิ üี Ï คร uา Ï ตกร า ¡ี เ รี ยกว า
`Chromatogram’ (รูปที ่ 1)
1
ร้ปที่ 1 lสuงตัวอยางIองÏครuาÏตกรา¡ี 2 lบบคอ (a)Ïค
รuาÏตกรา¡ี lบบคอñัuน (Colmn chromatography)
lñะ (!)Ï คร uา Ï ตกร า ¡ี lบบlผ นร ะ นา บ ("lanar
chromatography) (1 า ก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
Chromatography ประกอบu้วย 3 ส วนหñัก lu้lก
1. *tationary phas%
2. +o!il% phas%
3. สารผสuที ่1ะนาuาlยก (*ampl% mi,tr%)
การเคñ ่ อนที ่IองÏuเñกñสารuูกกาหนuÏuยสuuñระหวางlรง 2 lรง
2
a.
!.
- lรง0 uIอง mo!il% phas% 1ึ ่ ง1ะ¡าÏuเñก ñIองสาร
เ คñ ่ อนlปเ ร วหร อช้ าIึ นกับค uสuบัติ การñะñาย (-i.i&
chromatography) หร อการระเหย (/as Chromatography)
- lรงเหนี ่ ยวรั งIอง *tationary phas% 1ึ ่ง1ะuึงÏuเñกñIอง
สารที ่เกาะlว้
สuu ñIองทั งสองlรงนี 1ะlตกต างกันตาuชนิ uIองÏuเñก ñสาร
1ึงทา¡ห้ÏuเñกñIองสารผสuนั น เคñ ่ อนที ่ u้วยอัตราเร วlตกต าง
กัน 1ึงสาuารuที ่1ะlยกสารผสuออก1ากกันlu้ (รูปที ่2)
3
ร้ปที่ 2 lสuง 0%t%nsion m%chanism ¡นการlยกสารÏuยวิüี
Chromatography lบบตาง_
(*1 สารที ่ต้องการlยก2 ñูกศรlปกñับ 1 lรงระหวาง mo!il%
phas% lñะ stationary phas%)
(1 า ก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
Partition Chromatography
ÏuเñกñIองสารผสu1ะกระ1าย (partition) ระหวาง li.i&
stationary phas% lñะ mo!il% phas% mo!il% phas%
อา1เป นIองเหñว (-C2 3"-C) หร อเป นกา1 (/-C)
0%t%ntion Iึ นกับสuu ñระหว างการñะñายIองÏuเñก ñ¡น
stationary phas% lñะการเI้ าuาอยู ¡น mo!il% phas% (รู ปที ่
3)
4
ร้ ปที่ 3 การñะñายIองÏuเñกñสาร¡น stationary phas% lñะ
การเI้าuาอยู¡น mo!il% phas%
(1 า ก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
"artition co%44ici%nt2 5
6
1
ตัวอย างIอง "artition Chromatography lu้ lก /as li.i&
chromatography (/-C)2 pap%r chromatography
lñะ 7hin lay%r chromatography (7-C) บนตัวค า1 นuี ประ1
เชน silica g%l หร อ almina
สา ห รั บ pap%r chromatography ห ร อ 7-C
mo!il% phas% เป นสารผสuระหว างตัวทาñะñายuี Iั ว เช น น า
lñะตัวทาñะñายluuีIั วเชน !tanol ตัวทาñะñายuีIั ว1ะuูก
uู u1ับÏuยตัวค า1 นuี ประ1 เ¡ ่ อ 4orm stationary phas% uังนั น
สารที ่ ñะñาย¡นตัวทาñะñายuี Iั วก 1ะuู กเหนี ่ ยวรั งlว้ ตัวทา
ñะñายuีIั วนี 1ึงเรี ยกวาเป น ¨r%tar&%r8 สวนตัวทาñะñายluuีIั ว
1ะอยู รอบ_ stationary phas% uังนั นสารที ่ ñะñาย¡นตัวทา
ñะñายlu uี Iั ว ก 1ะเคñ ่ อนที ่ lปก อน ตัวทาñะñายlu uี Iั ว 1ึ ง
เรี ยกวาเป น ¨mo9%r8
5
:ควาuเI้uI้นIองสารที ่ñะñาย¡น mo!il%
phas%;
:ควาuเI้uI้นIองสารที ่ñะñาย¡น
stationary phas%;
Adsorption Chromatography
สารที ่ ñะñาย¡น li.i& (หร อ gas) phas% 1ะ int%ract
กั บ ผิ ว I อ ง ส า ร 1า ¡ ว ก 3y&ro,yapatit% (Ca
3
("<
4
)
2
2
Ca(<3)
2
)2 almina (=l
2
<
3
)2 +agn%sim car!onat% 1ึ ่ ง
นิ ยu¡ช้เคñอบบนlผนlก้ว สาหรั บ 7-C
หuู ที ่ uี Iั วบนสารเคñ อบlผ นlก้ว 1ะสร้าง¡ันüะluÏuรเ1น
กับสารที ่ต้องการlยก1ึ ่งñะñาย¡น organic sol9%nt
การชะสารทาÏuยเ¡ิ ่ u potarity Iองตัวทาñะñายเชน u้า¡ห้
ac%tonitrit% (C3
3
C>) ก ¡ห้ เติ u m%thanol (C3
3
<3) เ¡ ่ อlป
lย ง1ับกับสารเคñ อบบนlผ นlก้ ว บางครั งก ¡ช้ การชะlบบ
/ra&i%nt (รูปที ่ 4)
รู ปที ่ 4 ?@ABCDEE /ra&i%nt (FGH I J#KLMN@JFOP JOP QORS
*ol9%nt FTU QKV@LWE XLYMZRY[TKZ RY *ol9%nt 2 FOP@J@\]J
?WE *ol9%nt 1)
(1 า ก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
)
Ion-!"hang "hromatography
สาร1ะuูกuึงlว้Ïuยlรงuึ งuูuระหว าง หuู บน stationary phas%
1ึ ่ งuี ประ1 ตรงI้ าuกับสารที ่ ต้ องการlยก ion-%,chang%
chromatography uี 2 l บ บ ค อ =nion-%,chang% l ñ ะ
Cation-%,chang% 1ึ ่ งเรียกตาuประ1 Iองสาร lต คอñัuน 1ะ
บรร1u้วย stationary phas% ที ่uีประ1ตรงI้าu (รูปที ่ 52))
รูปที ่ # ^on-%,chang% chromatography
(1าก http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.htm
l)
การชะสารทาlu้Ïuย
- การเปñี ่ ยนlปñง p3 เ¡ ่ อ1ะ n%trali_% หuู ที ่ uี ประ1
ทั งที ่อยูบนÏuเñกñIองสารlñะบน stationary phas%
- เ¡ิ ่ uควาuเI้uI้นIองเกñ อ¡นบั¡เ¡อร ที ่ ¡ช้ชะ เ¡ ่ อlปlทนที ่ อิ ออ
นที ่1ับอยู
`
- ¡ช้ p3 หร อ salt gra&i%nt เ¡ ่ อเ¡ิ ่ uประสิ ทüิ ภา¡การ
lยก matri, ตัวกñางที ่¡ช้lยกสารlบงออกตาuประ1 ชั่ วคราว
รู ปที ่ $ (EQ) D]LSTACab ORScJZd ef I RYZd EQ stationary phas%
ef I QH Y J g BP h LP D ?Z &i%thylamino%thyl (6E=E) ?W E
car!o,ym%thyl (C+) (KZ@S) D]LS?@AFTKf I YQDTKSMN@Jab
ORSTACabef I p3 iZ @S[
j
%& 'i&tration Chromatography
uี ช ่ อ เ รี ยกอี กอย า ง อ ่ นว า /%l p%rm%ation หร อ *i_%-
E,clsion chromatography uี หñักการlยกตาuIนาu (lñะ
รูปราง) ÏuเñกñIองสาร uังรูปที ่ ` lñะlu้ผñออกuาuังรูปที ่ j
ร้ ปที่ ( lสuงการlยกสารตาuIนาuu้วยวิ üี g%l 4iltration
chromatography
(9oi& 9olm% 1 TAH J@iAORS mo!il% phas% ?Z RQef I
]@AaCRR?J@a@?MRKWJQk )
(1 า ก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
(
ร้ ปที่ ) Chromatogram Iองวิüี /%l 4iltration
chromatography
(1าก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
สภา ว ะ ที ่ ¡ ช้ ¡ นกา ร lยก1ะ เ ป นlบบ mil&2 non-&%natring
con&itions 1ึ ่งเหuาะสuสาหรั บการlยกÏปรตีนที่uีน าหนักÏuเñกñตางกัน
นอก1ากนั นยัง¡ช้สาหรั บ
- การI1ัuเอาเกñอออก (6%salting)
- Ïปรตีนที ่lยกÏuยวิüีนี ยังคงÏครงราง lat%rnary อยู
- สาuารu¡ช้ หา mol%clar $%ight Iองสารlu้ Ïuย
เทียบกับ stan&ar& prot%in ที ่ทราบ mol%clar $%ight
10
(1าก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
ชนิ uIอง matri, ที ่¡ช้¡นการ 4orm stationary phas% :
- cross-linm%& &%,tran polym%r (*%pha&%, /-
10 uึง /-200)
- cross-linm%& polyacrylami&% (niog%l "-2 uึ ง
"-300)
A''inity "hromatography
0%t%ntion เกิ u1าก !iosp%ci4ic int%raction ระหว าง ligan&
1ึ ่งเกาะอยูบน &%,tran หร อ c%lllos% matri, กับÏuเñกñIอง
สารผสu
ตารางที่ 1 lสuงชนิ uIองสารที ่ต้องการlยกกับ ligan& 1าเ¡าะที ่
เคñอบบน *tationary phas%
(1 า ก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
11
สารที ่ต้องการlยก ligan&
%n_ym% *!strat%2 co%n_ym%2 r%9%rsi!l%
comp%titor
antig%n =nti!o&y
hormon% 0%c%ptor2 !in&ing prot%in
r%c%ptor E44%ctor mol%cl%s %g. hormon%2
n%roto,in
การชะสารออก ทาlu้Ïuยการlทนที ่ u้วยสารñะñายที ่ uีอยู ligan&
อยู lต วิ üี นี สารที ่ ต้องการlยก1ะ1ับกับ ligan& ตอนuู กชะออก
uา 1ึงนิ ยu¡ช้การชะÏuยการเปñี ่ยนlปñง p3 เ¡ ่ อlปรบกวนการ
1ับระหวาง ligan& กับสารนั น
12
ร้ ปที่ * การเช ่ อu ligan& ¡ห้ เกาะอยู บนผิ วIอง matri, ¡ช้
cyanog%n !romi&%
( 1 า ก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
+,a&itati- Chromatographi" ana&ysis
- Papr . /hin 0ayr Chromatography
0%tar&ation 4actor (04) 1
เปรี ยบเทียบกับสารuาตร_านที่เคñ ่ อนที่ควบคูกันlปI้าง_
- อา1uองเห น1 uที ่ สารเคñ ่ อนที ่ lปÏuยการ0ี u¡ นสาร (เช น
¡วก ninhy&rin สาหรั บการวิเคราะหกรuอะuิÏน)
13
ระยะทางที ่สารเคñ ่ อนที ่
ระยะทางที ่ตัวทาñะñาย
เคñ ่ อนที ่
+,antitati- "hromatographi" ana&ysis
- %0C and 1P0C
gBPNHof cali!rat% FefYE?WE stan&ar& ef I eA@E
mol%clar $%ight DKP NNWLGp q Qef I giP?A@r (p%am ar%a)
(1 า ก
http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%ction3#s%ction3.html)
14
เคร ่ องuอ /-C an& 3"-C ปั11บัน 1ะlสuงผñ lñะคาuวuควาu
เI้uI้นIองสารออกuาlu้เñย
เอกสารอูางอิ งและแนะนำาอานเ!ิ่มเติม
1. http:##$$$.phys.ts.%&#a#s!'%cts(132)#*%c
tion3#s%ction3.html
2. http:##gc.&iscssing.in4o#gs#!_th%ory
3. http:##$$$.ch%m.9t.%&#ch%m-
%&#s%p#tlc#tlc.html
4. http:##$$$.chromatography.co.m#t%chni.s#nio#
!io_003.htm
15

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->